外泌体研究

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外泌体miRNA测序服务

外泌体可以携带丰富的RNAs(包含长链RNA和短链miRNA)、蛋白质等物质穿梭于细胞和组织之间,参与细胞间的通讯。外泌体中的miRNA具备广泛的生物活性,可参与机体免疫应答、抗原呈递、细胞分化、肿瘤生长于侵袭等多种生物过程。
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       外泌体(Exosomes)广泛分布于血浆、乳汁、唾液、尿液等体液中,是大小为30-150nm,具有磷脂双分子层膜结构的微小膜泡。外泌体可以携带丰富的RNAs(包含长链RNA和短链miRNA)、蛋白质等物质穿梭于细胞和组织之间,参与细胞间的通讯。

      外泌体中的miRNA具备广泛的生物活性,可参与机体免疫应答、抗原呈递、细胞分化、肿瘤生长于侵袭等多种生物过程。然而,外泌体中的miRNA虽然种类较多,但其丰度并不高,这就对外泌体miRNA检测技术的灵敏度和准确性提出了挑战。

 
 
 
     

     为有效解决外泌体miRNA筛选与检测的难点问题,华盈生物引进了先进的单分子标签(Unique Molecular Identifier,UMI)微量建库测序技术。在测序文库构建时,先将UMI标签在反转录阶段加入到每个原始的RNA分子上,再进行PCR扩增和测序。测序结果先与miRNA数据库进行比对,再对各miRNA所标记的UMI Counts进行归纳统计。理论上在PCR扩增后,同一样本中同一miRNA分子不同拷贝标记的UMI Counts增加,但种类及种类比与扩增前后保持不变。通过UMI种类进行各样本各miRNA定量值的校准,保证了测序结果在不同样本间miRNA的定量比值与原始样本起始miRNA含量始终保持一致,这样就避免了核酸在PCR放大过程中由于GC含量比不同等原因造成的PCR Bias现象。       UMI建库不仅显著提高了外泌体miRNA检测的准确性,也提高了其检测的灵敏度,降低了RNA样本用量(1-5ng即可完成建库测序),非常适合外泌体miRNA这种微量样本的测序研究。     

        同时,针对不同的样本类型和研究需求,华盈生物会针对性的推荐超速离心、尺寸排阻、超滤柱、沉淀法等不同的外泌体分离方法制备外泌体,以获得更加准确的miRNA测序数据。在外泌体验证阶段,华盈生物将根据不同的数据测序结果为用户提出有针对性验证策略和具体实施细则,结合华盈生物拥有的RT-PCR和数字PCR双平台的硬件设施支撑,可以为广大外泌体研究人员提供高品质的数据保障。

|   经典案例:一套外泌体miRNA测序数据,两篇Cell顶刊

        2017年和2021年,美国加利福利亚大学研究人员分别在Cell和Cell metabolism上发表了两篇外泌体miRNA调控胰岛素抵抗的重要研究成果。两项研究为同一课题组的系列研究,聚焦在脂肪组织中的巨噬细胞分泌的外泌体对于全身性胰岛素抵抗的调控机制。该两项研究从外泌体调控与胰岛素抵抗相关性的现象入手,通过miRNA测序发现了在肥胖和正常小鼠脂肪巨噬细胞分泌的外泌体中的一组差异miRNA,利用这套数中的2个miRNA分别在2篇文章中详细揭示了外泌体与胰岛素抵抗调控的创新机制。

 

具体研究思路与技术细节已录制成文献分析视频,可扫描下方二维码进行详细了解:

 

 

|   客户文献

[1]. Wang Feng, Qian Jin, Yang Ming-Yu, et al. MiR-6924-5p-rich exosomes derived from genetically modified Scleraxis-overexpressing PDGFRα(+) BMMSCs as novel nanotherapeutics for treating osteolysis during tendon-bone healing and improving healing strength. Biomaterials, 2021 Dec;279:121242. IF=12.479

[2]. Dong Z ,  Gu H ,  Guo Q , et al. Profiling of Serum Exosome MiRNA Reveals the Potential of a MiRNA Panel as Diagnostic Biomarker for Alzheimer's Disease[J]. Molecular Neurobiology, 2021(428-445). IF= 5.590

[3]. Bai X, Li J, Li L, et al. Extracellular Vesicles From Adipose Tissue-Derived Stem Cells Affect Notch-miR148a-3p Axis to Regulate Polarization of Macrophages and Alleviate Sepsis in Mice[J]. Frontiers in immunology, 2020, 11: 1391. IF= 7.561

[4]. Bian X, Li B, Yang J, et al. Regenerative and protective effects of dMSC-sEVs on high-glucose-induced senescent fibroblasts by suppressing RAGE pathway and activating Smad pathway[J]. Stem Cell Research & Therapy, 2020, 11: 1-16. IF= 5.985

[5]. Qiao L, Hu S, Liu S, et al. microRNA-21-5p dysregulation in exosomes derived from heart failure patients impairs regenerative potential[J]. The Journal of clinical investigation, 2019, 129(6): 2237-2250. IF=14.808

关键词:
外泌体、miRNA、转录组、小RNA、UMI测序
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发布时间:2021-08-11 17:21:10

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