新闻资讯
外泌体提取方法及其优缺点
- 分类：近期动态
- 作者：
- 来源：
【概要描述】外泌体提取-差速离心仍然是比较常用的外来体分离技术之一。该方法包括几个步骤，低速离心以去除细胞和凋亡片段，高速离心以去除较大的囊泡，以及高速离心以沉淀外来体:
外泌体提取方法及其优缺点
【概要描述】外泌体提取-差速离心仍然是比较常用的外来体分离技术之一。该方法包括几个步骤，低速离心以去除细胞和凋亡片段，高速离心以去除较大的囊泡，以及高速离心以沉淀外来体:
- 分类：近期动态
- 作者：
- 来源：
- 发布时间：2022-06-08 15:55
- 访问量：
1.外泌体提取-差速离心
差速离心仍然是比较常用的外来体分离技术之一。该方法包括几个步骤，低速离心以去除细胞和凋亡片段，高速离心以去除较大的囊泡，以及高速离心以沉淀外来体:
然而，应该注意的是，样品的粘度与分离的外来体的纯度显著相关。因此，高粘度的生物样品(如血浆和血清样品)需要更长的超速离心步骤和更高的离心速度。
步骤:300×g离心10分钟，取上清液。2000×g离心10分钟，收集上清液。1000× g离心30分钟，收集上清液。100，000× g，在4℃下连续离心90分钟，除去上清液，将剩余的沉淀物重新悬浮在PBS中，再次在100，000× g下离心90分钟。
2.外泌体提取-密度梯度离心
该方法将超速离心与蔗糖密度梯度相结合，以从非囊泡颗粒，如蛋白质和蛋白质/RNA聚集体中分离外来体。因此，这种方法可以从不同密度的颗粒中分离出囊泡，提取出含量较低的外来体。但是，合适的离心时间非常重要，否则，如果它们具有相似的密度，仍然可以在外泌体中发现污染的颗粒。2018年，Li K等人对这一方案进行了改进，回收率更高，纯度更高，结构和功能保留更好(Li K，Wong D，Hong K，Raffai R .气垫密度梯度超速离心(C-DGUC):一种用于分离、表征和使用外来体的精细高效方法，方法分子生物学。
3.外泌体提取-尺寸排阻色谱法
尺寸排阻色谱(SEC)是基于尺寸而非分子量分离大分子。在该技术中，使用填充有多孔聚合物微球的柱，分子根据其直径通过微球。半径较小的分子需要更长的时间才能迁移通过色谱柱的孔隙，而大分子则较早地从色谱柱中洗脱出来。尺寸排阻色谱可以精确地分离大分子和小分子。此外，不同的洗脱溶液可以应用于该方法。与离心法相比，层析分离被证明更有优势，因为层析分离的外来体不受剪切力的影响，剪切力可能会改变囊泡的结构。目前，SEC是一种广泛接受的从血液和尿液中分离外来体的技术。然而，这种外泌体提取方法需要很长时间，并且不适合处理大量样品。
4.外泌体提取过滤
超滤膜也可用于分离外来体。根据外来体的大小，从蛋白质和其他大分子中分离出外来体。比较常见的滤膜孔径有0.8μm、0.45μm或0.22μm，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外来体。也有设计为微柱的多孔二氧化硅纤毛，用于分离40-100nm的外来体:
但这种外泌体提取方法可能会因为滤膜的粘连而丢失外来体，过滤时的压力和剪切力可能会使外来体发生变形和损伤。
电话：400-869-2936
传真：021-33938792
QQ：2120485725
地址：上海市张江高科技园区法拉第路249号6幢B座
战略合作
