非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是全世界最常见的肝病，目前尚无获批用于治疗NAFLD的药物。补骨脂是我国传统中药，具有温肾助阳、温脾止泻平喘等功效，临床应用广泛。补骨脂二氢黄酮甲醚（Bavachinin）是一种从补骨脂中分离出来的一种活性成分，具有抗炎平喘及抗肿瘤等多种药理作用，具有较为广阔的开发前景。Bavachinin已被证明对NAFLD具有保肝作用，但其作用机制尚不明确。

2023年3月，中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所孙晓波教授团队在J Adv Res（IF=12.822）发表了题为“Bavachinin protects the liver in NAFLD by promoting regeneration via targeting PCNA”的文章，发现补骨脂中活性化合物Bavachinin能够靶向PCNA促进肝再生，保护高脂肪饮食诱发的非酒精性脂肪肝。

研究用高脂肪饮食HFD喂养仓鼠2周，并进行血液生化测试以确保仓鼠患上高脂血症。然后每天以50和100 mg/kg/天的剂量对HFD诱导的NAFLD仓鼠口服BVC，以ATO为阳参，持续4周，发现不同剂量的BVC均能降低血脂水平和LDL水平（图1A），减轻HFD引起的肝损伤（图1B）。

图1 BVC减轻高脂肪饮食诱导的NAFLD

为了识别BVC的目标，研究开展了基于活性的蛋白质组分析（ABPP）。研究首先合成BVC探针（XQ）（图2A），发现XQ与BVC具有相似的生物活性，随后将XQ与HepG2细胞蛋白裂解物充分孵育进行点击化学反应，与XQ结合的蛋白质用链霉亲和素珠捕获，然后洗脱下来电泳发现在XQ泳道中35和45 kDa之间有2个明显的条带（DMSO泳道中较浅），表明这些条带中的蛋白质可能是BVC的目标蛋白。因此，将条带进行LC-MS/MS鉴定（图2B）。以FC≥2和score≥ 5作为标准筛选，增殖细胞核抗原（PCNA，36 kDa）得分相对较高，且与再生密切相关，而肝脏通过再生来保护去免受内部和外部的侵害。因此，PCNA可能是BVC的靶标。

图2 ABPP技术筛选BVC靶点

随后，研究采用CETSA（图3A）、DARTS（图3B）、SPR（图3C）等多种实验验证BVC和PCNA的相互作用，这些结果均表明 BVC直接与PCNA结合。PCNA有多个不同配体的结合位点，包括Polδ、p21、polε、cyclin D等，分子对接（图3D）发现，BVC在Polδ和p21结合的口袋处获得最佳结合效果。Co-IP实验（图3E）发现BVC影响Polδ/p21与PCNA结合。BVC可显著增强PCNA与Polδ的结合，抑制p21与PCNA的结合。

图3 BVC靶点的验证

由于PCNA在DNA合成中起关键作用，研究聚焦于BVC对HepG2细胞增殖、细胞周期的影响，发现BVC促HepG2细胞增殖、增加G2/M期细胞数量。在NALFD仓鼠体内，BVC通过促进肝脏再生，保护肝细胞，抑制肝细胞凋亡。作用机制模式图如下：

图4 BVC作用机制模式图

靶点是中药活性成分在体内发挥作用的基础，靶点确定是中药研发的关键，然而目前关于中药作用靶点的揭示未能获得突破性进展，已成为中药现代化进程中的瓶颈问题，因此，用于靶点研究的新思路与新技术亟需被开发。

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|   相关文献

【1】Dong X, Lu S, Tian Y, et al. Bavachinin protects the liver in NAFLD by promoting regeneration via targeting PCNA. J Adv Res. 2023 ; S2090-1232(23)00059-0.