HMGB1是公认的ICD标志物之一，通过建立了HMGB1-Gluc报告基因筛选模型，结合三种细胞共培养体系（小鼠B16-OVA细胞、小鼠骨髓来源的树突状细胞BMDCs和CD8+ T细胞杂交瘤细胞B3Z）（图1A），从天然生物活性小分子化合物库（2569种天然产物）中筛选发现，竹节香附素A表现出良好的诱导ICD和激活T细胞的活性（图1B、C）。进一步研究显示，RA能显著提高共培养的CD8+ T细胞分泌的IL-2、IFN-γ、GZMB和TNF-α水平（图1D），还能促进BMDCs成熟，增强其抗原呈递功能，在动物水平RA处理后的肿瘤细胞作为疫苗使用可在小鼠体内诱导产生免疫记忆效应（图1E）。

研究接着在小鼠黑色素瘤和结肠癌的移植瘤模型评估RA的抗肿瘤活性，发现RA显著抑制肿瘤的生长，同时还可促进CD8+T细胞和CD103+ cDC1在肿瘤微环境中的浸润并增强其活性（图2A）。进一步采用RNA-seq结合PCR验证发现RA可显著激活肿瘤细胞中的NF-κB和Ⅰ型IFN信号通路（图2B）。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除Ⅰ型IFN信号通路上游关键信号分子后，发现RA诱导的NF-κB和Ⅰ型IFN信号活化是cGAS/STING依赖性的（图2C）。并且，敲除cGAS/STING或使用其特异性抑制剂可显著逆转RA诱导的CD8+ T细胞活化（图2D）。

为进一步研究RA调控cGAS/STING通路的机制，通过Pulldown+MS筛选RA在肿瘤细胞中的潜在结合蛋白，发现反式激活应答DNA结合蛋白-43（TDP-43）可能为RA诱导ICD的直接作用靶点（图3A）。TDP-43是一种定位于细胞核的DNA和RNA结合蛋白，与肌萎缩性侧索硬化症、阿尔茨海默病和癌症等多种疾病的发生发展有关，已有研究表明，TDP-43可在细胞核与细胞质间穿梭，且TDP-43的C端富含甘氨酸结构域，该结构域发生突变（A315T/Q331K）可诱导TDP-43进入线粒体并诱导释放mtDNA到细胞质中激活cGAS/STING。随后通过Pulldown+WB（图3B）、CETSA实验（图3C）和SPR（图3D）等验证两者存在直接互作。进一步发现RA可促进TDP-43定位至线粒体，诱导肿瘤细胞内活性氧ROS水平升高，造成线粒体膜电位下降以及mtDNA的释放，从而激活cGAS/STING/Ⅰ型IFN通路（图3E）。小鼠移植瘤实验结果表明将肿瘤细胞的TDP-43敲除后，RA的抗肿瘤作用被逆转（图3F）。

天然产物是药物发现的宝贵资源，挖掘他们在不同疾病种的疗效并阐明其作用靶点和作用机制对扩大其临床适应症至关重要。研究筛选通过基于细胞表型的天然产物化合物库筛选确定了具有诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡的天然产物活性分子竹节香附素A，进一步通过靶点筛选策略发现并验证了竹节香附素A的直接靶点TDP-43，最后深入机制研究发现竹节香附素A通过TDP-43引起下游相关通路的激活，为临床上肿瘤的免疫治疗提供了新思路。

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