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信号通路磷酸化抗体芯片如何同时检测多条信号通路?

信号通路磷酸化抗体芯片如何同时检测多条信号通路?

【概要描述】以信号通路磷酸化抗体芯片为例,该磷酸化抗体芯片主要基于载玻片底物。在芯片衬底上进行化学改性后,利用专利的三维聚合物膜技术将抗体放置在芯片上。

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【概要描述】以信号通路磷酸化抗体芯片为例,该磷酸化抗体芯片主要基于载玻片底物。在芯片衬底上进行化学改性后,利用专利的三维聚合物膜技术将抗体放置在芯片上。

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  • 发布时间:2022-08-25 17:37
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信号通路磷酸化抗体芯片如何同时检测多条信号通路?

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信号通路磷酸化抗体芯片为例,该磷酸化抗体芯片主要基于载玻片底物。在芯片衬底上进行化学改性后,利用专利的三维聚合物膜技术将抗体放置在芯片上。这样,1318个高密度抗体在芯片底物上可以检测到432个信号蛋白的679个磷酸化位点。这些信号蛋白广泛参与许多重要的信号通路。并且针对每个特定的蛋白磷酸化位点,芯片设置了一对抗体检测其磷酸化和非磷酸化状态,提高了磷酸化检测的敏感性和稳定性,从而实现对多种信号通路的全面筛选。

 

信号通路磷酸化抗体芯片针刺虽能显著防治,但其具体机制尚不清楚。为了先明确的发病机制,研究人员建立了ova诱导的大鼠过敏性模型,并分析了肺组织中MT-2蛋白的表达水平。发现模型组MT-2表达水平降低50%以上。为了验证这一假设,研究人员通过基因敲除,测试了MT-KO小鼠对的易感性,发现mt敲除小鼠比模型组有更高的肺阻力!重组MT-2蛋白的反证据高度一致:经颈外静脉注射MT-2可显著降低大鼠的肺阻力!研究组还将MT-2与fda批准的药物特布他林(TB)和可的松(HC)进行了比较,结果发现,每公斤0.1 μg的MT-2的疗效是普通药物的550倍甚至15万倍。更令人惊讶的是,在注射MT-2后的3 ~ 8分钟,肺阻力显著下降,MT-2对乙酰胆碱(乙酰胆碱)诱导的气管平滑肌细胞(ASMCs)收缩更有效。这种低剂量、高效率的MT-2让研究人员兴奋不已!通过共聚焦观察,研究人员发现MT-2定位于asmc的膜上。MT-2与ASMCs结合分析证实了MT-2与ASMCs之间存在受体介导的结合。为了找到这种中间受体,研究人员使用传统的pull down + LC-MS/MS技术来识别细胞膜上的两种mt -2结合蛋白:烯醇化酶-1和TG2。但信号通路磷酸化抗体芯片在进一步的竞争性结合实验中,发现只有TG2阻断抗体可以抑制MT-2与asmc的结合,因此研究重点集中在MT-2结合受体TG2上。随后的细胞结合实验、共聚焦观察和分子动力学SPR分析证实,MT-2可以结合asmc细胞膜上的TG2。为了进一步证实TG2对MT-2 asmc的有效弛散作用,研究者通过敲除基因分析了MT-2对TG2- ko小鼠asmc的影响。结果发现,一旦敲除TG2, MT-2对asmc的有效弛缓作用也消失,过敏性模型小鼠更容易发生!



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