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外泌体提取方法及其优缺点

外泌体提取方法及其优缺点

【概要描述】外泌体提取-差速离心仍然是比较常用的外来体分离技术之一。该方法包括几个步骤,低速离心以去除细胞和凋亡片段,高速离心以去除较大的囊泡,以及高速离心以沉淀外来体:

外泌体提取方法及其优缺点

【概要描述】外泌体提取-差速离心仍然是比较常用的外来体分离技术之一。该方法包括几个步骤,低速离心以去除细胞和凋亡片段,高速离心以去除较大的囊泡,以及高速离心以沉淀外来体:

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  • 发布时间:2022-06-08 15:55
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1.外泌体提取-差速离心


差速离心仍然是比较常用的外来体分离技术之一。该方法包括几个步骤,低速离心以去除细胞和凋亡片段,高速离心以去除较大的囊泡,以及高速离心以沉淀外来体:


然而,应该注意的是,样品的粘度与分离的外来体的纯度显著相关。因此,高粘度的生物样品(如血浆和血清样品)需要更长的超速离心步骤和更高的离心速度。


步骤:300×g离心10分钟,取上清液。2000×g离心10分钟,收集上清液。1000× g离心30分钟,收集上清液。100,000× g,在4℃下连续离心90分钟,除去上清液,将剩余的沉淀物重新悬浮在PBS中,再次在100,000× g下离心90分钟。

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2.外泌体提取-密度梯度离心


该方法将超速离心与蔗糖密度梯度相结合,以从非囊泡颗粒,如蛋白质和蛋白质/RNA聚集体中分离外来体。因此,这种方法可以从不同密度的颗粒中分离出囊泡,提取出含量较低的外来体。但是,合适的离心时间非常重要,否则,如果它们具有相似的密度,仍然可以在外泌体中发现污染的颗粒。2018年,Li K等人对这一方案进行了改进,回收率更高,纯度更高,结构和功能保留更好(Li K,Wong D,Hong K,Raffai R .气垫密度梯度超速离心(C-DGUC):一种用于分离、表征和使用外来体的精细高效方法,方法分子生物学。


3.外泌体提取-尺寸排阻色谱法


尺寸排阻色谱(SEC)是基于尺寸而非分子量分离大分子。在该技术中,使用填充有多孔聚合物微球的柱,分子根据其直径通过微球。半径较小的分子需要更长的时间才能迁移通过色谱柱的孔隙,而大分子则较早地从色谱柱中洗脱出来。尺寸排阻色谱可以精确地分离大分子和小分子。此外,不同的洗脱溶液可以应用于该方法。与离心法相比,层析分离被证明更有优势,因为层析分离的外来体不受剪切力的影响,剪切力可能会改变囊泡的结构。目前,SEC是一种广泛接受的从血液和尿液中分离外来体的技术。然而,这种外泌体提取方法需要很长时间,并且不适合处理大量样品。


4.外泌体提取过滤


超滤膜也可用于分离外来体。根据外来体的大小,从蛋白质和其他大分子中分离出外来体。比较常见的滤膜孔径有0.8μm、0.45μm或0.22μm,可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外来体。也有设计为微柱的多孔二氧化硅纤毛,用于分离40-100nm的外来体:


但这种外泌体提取方法可能会因为滤膜的粘连而丢失外来体,过滤时的压力和剪切力可能会使外来体发生变形和损伤。


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