mTSA是一种基于酪胺信号放大（Tyramide Signal Amplification，TSA）、可剪切荧光素与温和抗体洗脱的循环多重荧光免疫组化技术。通过“染色—成像—信号剪切—抗体洗脱—下一轮染色”的循环流程，可在同一张组织切片上依次检测多个蛋白标志物，可达几十色。

该技术适用于FFPE组织切片等样本，可用于细胞类型识别、多标志物共定位、细胞密度统计，以及不同组织区域中的空间位置关系分析。与通常检测5—9色的传统多重荧光免疫组化相比，mTSA更适合标志物数量较多、组织微环境复杂或样本较为珍贵的研究。

mTSA主要解决哪些科研问题？

● 同一张组织切片中包含哪些细胞类型和细胞亚群？

● 不同细胞在组织中的数量、密度和分布位置有何差异？

● 多个蛋白标志物是否在同一细胞或同一区域中共表达？

● 不同组织区域之间的细胞组成和空间结构是否存在差异？

● 在样本量有限的情况下，如何同时获得更多原位蛋白信息？

● 如何在复杂组织微环境中综合观察多种细胞及其空间位置关系？

mTSA与传统mIHC有什么区别？

若研究只需要5—9个标志物并强调流程简洁，可优先考虑传统mIHC；若标志物数量较多、样本有限，或需要更全面地观察复杂组织微环境，可考虑mTSA。

|   技术原理

1. TSA原位信号放大

利用酪胺信号放大技术，在靶标位点原位沉积荧光信号，提高低丰度靶标的检测灵敏度。

2. 可剪切荧光信号

每轮染色和成像完成后，通过温和荧光剪切方式去除本轮荧光信号，为下一轮标志物检测释放成像通道。

3. 温和抗体洗脱

采用温和抗体解离技术洗脱上一轮一抗和二抗，减少强酸、强碱及高温处理对组织抗原和结构的影响。

4. 多轮循环检测

重复进行染色、成像、信号剪切和抗体洗脱，完成多个标志物在同一组织切片上的原位检测。

|   检测流程

图2｜mTSA多重实验流程示意图

1. 研究需求与Panel设计

根据研究问题确定标志物组合，并沟通染色方案。

2. 样本准备与质量评估

按要求提供组织蜡块、石蜡切片或新鲜样本，并完成实验前质控。

3. 循环染色与成像

每轮完成部分靶标染色和荧光成像。

4. 荧光剪切与抗体洗脱

去除上一轮荧光信号和抗体复合物，为下一轮染色做准备。

5. 完成多轮检测

按照Panel方案重复循环，直至完成全部标志物检测。

6. 图像处理与结果分析

对多轮图像进行处理，获得细胞类型、密度、共定位及空间位置关系等结果。

|   核心优势

|   应用场景

1. 肿瘤微环境

在同一张组织切片上同时观察多种肿瘤相关和免疫相关标志物，比较不同组织区域中的细胞类型、密度和空间分布。

2. 细胞衰老与细胞死亡

围绕细胞衰老、凋亡、铁死亡和细胞自噬等过程设计多标志物组合，观察相关蛋白的共表达与组织定位。

3. 代谢与神经相关研究

在保留组织结构的基础上，分析多个蛋白标志物在不同细胞和组织区域中的表达与空间分布。

4. 空间多组学研究

可作为空间多组学研究中的蛋白层面原位检测手段，用于补充组织中的多蛋白表达和空间信息。

|   图像案例

图3｜不同ROI及多标志物荧光成像示例（原始资料图）

|   样本说明

mTSA可接收组织蜡块、石蜡切片和新鲜样本。为提高实验成功率，建议在送样前完成样本类型、组织面积、固定条件及切片状态的沟通。

|   服务流程

图4｜mTSA项目服务流程示意图

服务流程包括需求沟通、染色方案设计、样本寄送与质控、预实验、正式实验和结果报告。若样本质控或预实验不符合要求，将根据具体原因反馈调整建议。

|   FAQ

1.mTSA是什么技术？

A：mTSA是一种基于TSA信号放大、可剪切荧光素和温和抗体洗脱的循环多重荧光免疫组化技术，可在同一张组织切片上进行多轮蛋白标志物检测。

2.mTSA和传统多重荧光免疫组化有什么区别？

A：传统mIHC通常在同一轮中平行检测多个荧光通道，检测通量通常为5—9色；mTSA采用循环检测策略，通过多轮信号剪切和抗体洗脱扩展检测通量。

3.mTSA和传统多重荧光免疫组化有什么区别？

A：传统mIHC通常在同一轮中平行检测多个荧光通道，检测通量通常为5—9色；mTSA采用循环检测策略，通过多轮信号剪切和抗体洗脱扩展检测通量。

4.mTSA为什么适合检测低丰度蛋白？

A：TSA信号放大可在靶标位点原位沉积更多荧光信号，从而提高低丰度靶标的检测灵敏度。

5.mTSA支持哪些样本类型？

A：可接收组织蜡块、石蜡切片和新鲜样本，具体适配情况需在项目启动前评估。

6.石蜡切片的推荐厚度是多少？

A：推荐切片厚度为4 μm，并使用防脱载玻片。

7.mTSA适合珍贵或有限样本吗？

A：适合。同一张切片可进行多轮标志物检测，有助于减少多张连续切片带来的样本消耗。

8.mTSA可以分析哪些空间信息？

A：可统计不同组织区域中的细胞类型和密度，并观察多标志物共定位及细胞的空间位置关系。

9.mTSA完成后是否可以做HE染色？

A：可以。完成mTSA实验后可提供原片HE染色，需要在送样单或项目申请时提前备注。

10.mTSA适合哪些研究方向？

A：可用于肿瘤微环境、细胞衰老、凋亡、铁死亡、细胞自噬、代谢、神经及空间多组学等研究方向。