自身抗体标志物

① 许多自身免疫性疾病的标志物，其存在与否及滴度高低有助于疾病的诊断与分类；

② 可直接介导组织损伤；

③ 可干扰靶蛋白的正常功能；

④ 可作为疾病活动度与预后的监测指标之一，其滴度变化常与病情活动相关。因此，自身抗体的检测与分析，是理解、诊断和管理自身免疫性疾病的核心环节[1]。

HuProt™20K人类蛋白组芯片，芯片上有超过2万种人类全长蛋白质（16794种人类基因编码蛋白和124种小鼠基因编码蛋白质），这些蛋白广泛覆盖受体、转录因子、激酶、胞外基质蛋白、细胞骨架蛋白等30余种蛋白类型，是目前世界上通量最高的蛋白质芯片。这些重组蛋白均采用酵母表达系统，逐个进行表达与纯化鉴定。在芯片上每个蛋白质均设置技术重复，并设有多种质控点，确保实验体系稳定可靠。

|   20K芯片筛选自身抗体的优势

●  芯片覆盖近2万种人类蛋白质，获得自身抗体概率高；

●  较质谱技术更适用于血清/血浆蛋白筛选；

●  可追溯组织中自身抗体对应抗原的异常，理解发病机理；

●  可订制小芯片，用于扩大样本验证实验；

●  研究成果的转化应用和开发有极强便利性。

|   自身抗体筛选流程

|   经典案例1

唐氏综合征（DS）患者除认知与发育障碍外，还表现出对严重感染和自身免疫性疾病（如甲状腺炎、I型糖尿病等）的显著易感性。研究者推测，21号染色体的三倍体可能通过引发持续的免疫激活，进而破坏自身耐受，导致自身抗体产生。

这篇发表在《Nature》期刊上的研究首先对DS的稳态血浆进行了luminex多重细胞因子检测，结果显示约三分之一的DS个体存在稳定的“细胞因子病”，DS(n=21)/健康(n=10)。对PBMC进行质谱流式CyTOF检测，DS(n=4)/健康(n=6)，结果显示DS患者的CD4 T细胞持续处于活化状态；同时，虽然总B细胞减少，但浆母细胞和一类具有自身免疫倾向的 CD11c⁺ Tbet^high CD21^low B细胞显著升高。

由于免疫激活状态与自身免疫密切相关，为了直接描绘其自身免疫靶点，研究者使用HuProt 20K人类蛋白质组芯片对DS(n=5)、健康(n=4)及其他自身免疫疾病患者血浆进行了无偏倚筛查。最终在DS患者中鉴定出365种特异性升高的自身抗体，其靶抗原富集于胃肠道、胰腺、甲状腺及中枢神经系统等DS常受累器官。该自身抗体谱在范围上与IPEX综合征（一种T调节细胞缺陷病）更为相似，而与APS-1差异较大。

最终，这项研究揭示了唐氏综合征中存在一个由稳态细胞因子病→CD4 T细胞过度活化→CD11c⁺ B细胞异常扩增构成的自身免疫易感轴，并描绘了其独特的自身抗体谱。该发现不仅深化了对DS免疫病理的认知，更重要的是，研究通过体外实验证明JAK抑制剂或IL-6阻断剂能逆转T细胞的异常活化，为干预DS的自身免疫并发症提供了潜在的治疗策略。

|   经典案例2

由常染色体隐性遗传AIRE缺陷引起的自身免疫性多内分泌腺病综合征1型（APS-1）的患者体内会产生中和I型干扰素（IFNs）的自身抗体。在小鼠髓质胸腺上皮细胞(mTECs)中，NF-κB可调控Aire的表达。于是，研究人员猜测NF-κB突变的患者也会产生抗IFNs的自身抗体。

这篇发表在《Nature》期刊上的研究结合家庭谱系及基因测序，筛选出了73人的NFKB2突变阵列。Western Blot结果表明，一共有3种NFKB2突变类型。结合质谱流式CyTOF检测，APS-1(n=6),p52^LOF/IκBδ^GOF(n=4)，发现p52^LOF/IκBδ^GOF亚型存在B细胞与T细胞减少的情况，同时临床数据显示该类患者病毒易感性相较于其他亚型较高，是一种特殊的突变亚型。

由于APS-1疾病与p52^LOF/IκBδ^GOF都与AIRE蛋白缺失相关，为了全面比较两者的自身抗体，作者团队使用了HuProt 20K人类蛋白芯片测量队列的血浆样本，APS-1(n=15),p52^LOF/IκBδ^GOF(n=13)，发现二者自身抗体存在明显差异，仅在IFN相关的自身抗体上存在大占比重合。该结果直接证明p52^LOF/IκBδ^GOF与APS-1虽然都损害了AIRE表达，产生IFNs，却是不同疾病。

|   相关文献

[1]. Pisetsky DS. Pathogenesis of autoimmune disease. Nat Rev Nephrol. 2023 Aug;19(8):509-524.

[2].Le Voyer, T., Parent, A.V., Liu, X., et al. Autoantibodies against type I IFNs in humans with alternative NF-κB pathway deficiency. Nature 623, 803–813 (2023).

[3]. Malle L, Patel RS, Martin-Fernandez M., et al. Autoimmunity in Down's syndrome via cytokines, CD4 T cells and CD11c+ B cells. Nature. 2023 Mar;615(7951):305-314.