三级淋巴结构（Tertiary Lymphoid Structures, TLSs）是在慢性炎症病变（包括肿瘤）中形成的异位免疫细胞聚集体，由T细胞区和B细胞滤泡等有序结构组成，其成熟形式包含生发中心。大量临床研究已证实，肿瘤内TLSs的存在与免疫检查点阻断（ICB）治疗的更好应答和患者生存改善密切相关，因此TLSs被视为极具吸引力的免疫治疗靶点。

华盈生物“PCF空间单细胞蛋白组”目录抗体库已收录TLS相关marker，包括但不限于：

1、结构分区标志物（定义TLS的空间组织架构）

2、生发中心与B细胞功能标志物（评估B细胞区室的功能状态）

3、T细胞功能与免疫调控标志物（揭示TLS的免疫调节网络）

此前研究发现DC-LAMP⁺成熟树突状细胞（DCs）是人类TLSs的特异性标志物，CD11c⁺细胞在小鼠肺部感染模型中对TLSs的维持至关重要。然而，关键的机制性问题长期悬而未决：主要组织相容性复合体I类（MHC-I）和II类（MHC-II）抗原呈递，尤其是特定DC亚群的交叉呈递，在TLS的启动、维持和功能中究竟扮演何种角色？鉴于TLSs与ICB应答的强关联，解析TLSs的细胞和分子驱动因素成为了肿瘤免疫学领域的核心优先事项。

近期，美国西奈山伊坎医学院的研究团队及多国合作者在《Science》上发表了题为"Dendritic cells control tertiary lymphoid structure development and maintenance in cancer"的研究论文。该研究综合运用Visium 空间转录组、Visium HD空间转录组、MERFISH靶向空间转录组和多重空间蛋白组（20-plex）等多种空间组学技术，结合系统性基因工程小鼠模型（包括多种条件性敲除和骨髓嵌合体），全面解析了DCs在肿瘤TLSs形成、维持和功能中的核心作用。该研究还利用多项临床试验队列验证了成熟DC-TLS轴的临床意义，揭示了成熟DC富集不仅可作为TLS存在的分子指标，还可能作为ICB疗效的预测性生物标志物。

成熟DCs在人肿瘤TLSs中的富集与空间定位

研究团队对非小细胞肺癌（NSCLC）、肝细胞癌（HCC）、结直肠癌（CRC）和肾透明细胞癌（ccRCC）等多种人类肿瘤进行了Visium空间转录组分析。结果显示，成熟DC基因以及cDC1基因、TFH细胞基因、TPEX细胞基因和生发中心B细胞基因在病理学注释的肿瘤内TLSs中显著富集，而在肿瘤核心区域则呈去富集状态。通过MERFISH靶向空间转录组（500个基因探针）在单细胞分辨率下分析NSCLC和HCC样本，研究进一步证实：成熟DCs在TLSs中显著富集，而与其未成熟的cDC1s和cDC2s在TLS外分布不同。值得注意的是，肿瘤中的cDC1s相较于cDC2s展示出更高的成熟DC相关基因表达，提示cDC1s是TLS内抗原负载成熟DCs的主要贡献者。

空间邻近分析揭示，在TLS内部，成熟DCs与初始B/T细胞、生发中心B细胞、TFH细胞和TPEX细胞在30 μm半径内紧密相邻。多重成像进一步在蛋白质水平确认了DC-LAMP⁺成熟DCs和CLEC9A⁺ cDC1s在TLSs中的富集。有趣的是，研究还鉴定出一种共表达CLEC9A和DC-LAMP的cDC1向成熟DC过渡的中间状态细胞，同样显著富集于TLS中，暗示TLS是cDC持续成熟的关键场所。在空间定位上，成熟DCs主要位于T细胞区或T-B细胞区交界处，邻近高内皮微静脉（HEVs），与其在淋巴结中的定位模式高度相似。

该研究提出了一个系统性的TLS形成与维持的双阶段模型：

阶段一TLS启动（tdLN依赖期）：（1）cDC1捕获肿瘤抗原后，经历IFN-γ驱动的成熟程序（上调CCR7、CD40、CD86等）；（2）成熟cDC1通过CCR7迁移至tdLNs；（3）在tdLNs中通过WDFY4依赖性交叉呈递激活肿瘤特异性T细胞；（4）活化的T细胞被募集至肿瘤部位，启动免疫聚集体的形成。

阶段二TLS维持（局部自主期）：（1）cDC1停止向tdLNs迁移，转而通过CCR7向肿瘤内CCL19⁺基质中枢迁移；（2）在TLS内，cDC1通过MHC-II和MHC-I共呈递肿瘤抗原给CD4⁺和CD8⁺ T细胞；（3）CD40许可的cDC1维持TFH细胞库、促进生发中心形成和肿瘤特异性IgG产生；（4）cDC1-MHC-I互作促进TPEX细胞向效应CD8⁺ T细胞分化；（5）由此形成正向免疫反馈环，持续维持TLS的结构和功能。

该研究首次从TLS启动的淋巴结依赖阶段和TLS维持的局部自主阶段两个时序维度，以及cDC1迁移定位、抗原呈递和免疫细胞互作三个功能维度，系统阐明了成熟cDC1s作为TLS"指挥者"的核心机制。

| 参考文献

Mattiuz R, Boumelha J, Aerakis E, et al. Dendritic cells control tertiary lymphoid structure development and maintenance in cancer. Science. 2026;393(6808):eady1678.