免疫衰老是人类衰老的核心标志，并导致年龄相关的免疫功能衰退。然而，人类淋巴器官中衰老相关表型的演化机制仍不明确。近期，《Cell Press Blue》期刊发表了一项题为“A spatial multi-omics atlas of immunosenescence reveals germinal-center B cell dysfunction in human lymph nodes”的论文。该研究通过整合单scRNA-seq、PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组、DBiT-seq空间转录组、CosMX SMI空间单细胞转录组、及LCM-MS空间蛋白组等技术，系统解析了人类全生命周期淋巴结的年龄相关性衰老特征。

为探究人类淋巴结（LNs）中与衰老相关及年龄依赖性的变化，研究分析了来自65名供体（男性41例，女性24例；共计108份样本）的完整淋巴结切除或穿刺活检组织标本。淋巴结样本依据年龄分为三组：第1组（<50岁，n=26）、第2组（50–69岁，n=15）和第3组（≥70岁，n=10），中位年龄分别为32岁、56岁和75岁。所有组织均经病理医师确认为组织学正常。为实现多模态空间分析，研究纳入了新鲜冷冻（FF）与福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）两种类型的组织。其中，FF样本被用于DBiT-seq空间转录组、空间ATAC-seq和LCM-MS空间蛋白组分析，而FFPE样本则采用PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组、CosMX SMI空间单细胞转录组、 FFPE兼容的Patho-DBiT-seq空间转录组，以及受激拉曼散射（SRS）显微镜代谢成像进行检测。

为确保形态结构完整并满足不同检测平台的兼容性，组织被连续切片至特定载玻片上，包括用于H&E染色/免疫组化（IHC）的标准载玻片、用于DBiT-seq和PCF(CODEX)的多聚赖氨酸（PLL）包被载玻片，以及用于CosMx的Superfrost Plus载玻片。

连续组织切片依次进行组织学H&E染色（切片1）、PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组（切片2）、IHC免疫组织化（切片3）、受激拉曼光谱成像（切片4）、DBiT-seq（切片5）及空间ATAC-seq（切片6）。通过空间多组学数据整合，全面解析了人类淋巴结组织内的细胞与分子特征。

研究还整合了来自Tabula Sapiens（TS）及二级淋巴器官（SLO）图谱的公共单细胞RNA测序（scRNA-seq）数据集，建立了单细胞转录组参考图谱，涵盖了来自14例SLO样本及25例外周血供体的约510,000个单细胞转录本。组织中衰老样细胞（SnCs）的识别依赖于PCF(CODEX)技术，通过p16、p21、HMGB1及γ-H2AX四种经典标志物进行原位鉴定。最终整合的图谱包含了来自56个个体的超过2000万个单细胞的空间数据，其中包括通过PCF(CODEX)分析的18例全淋巴结样本及81个组织芯、11例DBiT-seq空间转录组样本，以及9例空间ATAC-seq样本。研究进一步筛选出1–2例典型样本，分别利用CosMx、LCM-MS及SRS技术进行了深入表征。该研究资源使得我们能够高分辨率地分析人类淋巴结衰老过程中衰老样细胞的丰度、空间分布及其微环境背景，包括对衰老相关分泌表型（SASP）、DNA损伤反应（DDR）、炎性衰老及免疫衰老通路的探究，并揭示其与代谢及表观遗传机制的关联。

研究最核心的发现是通过对51名供体（年龄18–86岁）的99份淋巴结切片进行PCF(CODEX)空间单细胞蛋白组分析（覆盖约2000万个细胞），在单细胞分辨率下绘制了p16、p21、HMGB1及γ-H2AX等衰老标志物的图谱，鉴定出多种具有衰老特征的细胞类型，并揭示了其随年龄增长从滤泡外区域向生发中心逐步迁移的空间演变规律。在老年淋巴结中，生发中心B细胞呈现出衰老相关程序的局灶性累积，伴随功能特征受损、代谢重塑及调控网络改变。上述发现构建了人类淋巴组织免疫衰老的空间分布图谱，并确立了生发中心B细胞作为年龄相关性免疫功能障碍的关键靶位。

| 参考文献

Farzad N, Enninful A, Lu Y  et al. A spatial multi-omics atlas of immunosenescence reveals germinal-center B cell alteration in human lymph nodes. Cell Press Blue, 2026.