2025年7月16日，四川大学华西医院胸外科刘伦旭/李凯/林苹教授团队在《Signal Transduction and Targeted Therapy》（IF=52.7）在发表题为“DDX39B K63-linked ubiquitination mediated by TRIM28 promotes NSCLC metastasis by enhancing ECAD lysosomal degradation”的研究论文。研究发现DDX39B是NSCLC患者生存率低的独立标志物，DDX39B通过与含三基序蛋白28（TRIM28）相互作用，发生由TRIM28介导的泛素化使DDX39B稳定并上调，最终促进癌症侵袭和EMT重编程。此外，研究者通过筛选和验证实验发现，FDA批准药物青蒿琥酯能够靶向DDX39B-TRIM28互作界面，对NSCLC转移具有显著的抑制作用，是一种有潜力的治疗手段。

|   01、DDX39B蛋白与非小细胞肺癌转移的潜在关联

为阐明DDX39B与NSCLC的临床相关性，研究者采用组织芯片和数据分析探究DDX39B的表达水平，证实DDX39B在癌组织中的蛋白表达和mRNA水平显著增加，且DDX39B的高表达与NSCLC转移病变和不良预后相关（图1A-B）。鉴于上皮间充质转化（EMT）是转移中的关键过程，研究者构建了EMT转移模型探究DDX39B的表达情况。实验结果显示，DDX39B在肿瘤转移过程中显著上调，且该过程可能与其稳定性升高有关（图1C）。随后的体内外实验结果证实，DDX39B在NSCLC转移过程中的表达水平显著上调（图1D-E）。

鉴于E3泛素连接酶在蛋白表达和稳定性调控中的关键作用，研究者采用IP-MS鉴定DDX39B潜在的互作蛋白，并将鉴定结果与BIOGRID数据库和iUUCD2.0数据库进行联合分析。结果发现TRIM28可能是与DDX39B互作的E3泛素连接酶（图2A-B），免疫共沉淀等实验也证实了二者的相互作用（图2C-D）。进一步，研究者采用分子对接预测二者间发生相互作用的关键氨基酸，结合GST pull down实验结果，DDX39B的P322残基是TRIM28的关键结合位点（图2E-F）。

随后，研究者通过敲除和过表达实验探究TRIM28对DDX39B的影响，结果显示，TRIM28缺失显著下调了NSCLC细胞中DDX39B的蛋白水平，而TRIM28过表达则增强了其表达水平（图3A）。此外，过表达TRIM28主要增加了DDX39B的K63连接的泛素化（图3B），结合IP-MS和点突变等实验结果，证实TRIM28通过在K241、K384和K398残基触发K63连接的多泛素化来稳定DDX39B蛋白（图3C）。研究者通过功能性实验确认了TRIM28介导的K63连接的多泛素化DDX39B在NSCLC病理进程中的作用，实验结果表明，DDX39B的上调显著促进了NSCLC细胞的转移和EMT重编程（图3D），而抑制DDX39B-TRIM28相互作用能够有效降低DDX39B的促进癌细胞转移和EMT重编程作用（图3E）。

为了揭示DDX39B介导癌症转移和EMT的内在机制，研究者分析了DDX39B的相互作用蛋白，结合实验结果，发现DDX39B能够与促进EMT和转移的关键因子ECAD发生直接互作，且DDX39B主要通过溶酶体途径促进ECAD的降解（图4A）。鉴于E3泛素连接酶Hakai与ECAD的泛素化和溶酶体降解存在潜在关联，且Src调控的ECADTyr754磷酸化是Hakai介导ECAD泛素化的前提，研究者对此展开深入探究，结果显示，DDX39B与ECAD结合，同时招募Src和Hakai来促进ECAD的磷酸化和泛素化-溶酶体降解（图4B）。而ECAD的过表达能够有效抑制DDX39B介导的EMT重编程和癌细胞转移，所以抑制ECAD对DDX39B介导的NSCLC病理进程具有重要作用（图4C）。

图4  TRIM28通过触发多位点的K63连接多泛素化来稳定DDX39B，靶向抑制该相互作用能够有效降低癌细胞转移和EMT重编程

基于前序的实验结果，靶向DDX39B-TRIM28可能是一种治疗NSCLC侵袭的有效策略。由此，研究者利用虚拟筛选寻找能够靶向DDX39B-TRIM28结合关键基团P322的小分子药物。结果显示，FDA批准并在全球范围内广泛用于抗疟的小分子药物青蒿琥酯是一种潜在的候选药物（图5A）。随后的SPR、CETSA和BLI等实验结果共同证实，青蒿琥酯能够与DDX39B发生直接相互作用（图5B-D），并破坏DDX39B-TRIM28结合，从而使DDX39B发生降解，最终抑制NSCLC细胞转移（图5E-F）。

|   总结与讨论

发现新的临床疾病标志物是生物医学研究中重要的研究领域，有些临床标志物仅能够对疾病的发生和转归进行预判，例如甲胎蛋白AFP对于肝癌的诊断。而有些标志物是疾病发展过程中重要的驱动基因和蛋白，它们的差异表达不仅可以提示疾病当下的病理状态，而且能够直接造成疾病的进一步发生发展。本研究中发现的DDX39B蛋白在非小细胞肺癌病理进程中不仅可以作为标志物，而且可以作为治疗靶点。针对这类非常有价值的疾病标志物，筛选出易于临床施用的抑制剂药物，将加速基础研究向临床的快速转化，迅速提升研究的实用价值。

针对特定的靶点蛋白进行小分子抑制剂筛选，一般有两种策略：

策略1.先通过虚拟筛选，初步锁定候选小分子，再进行一系列的分子互作和功能验证，确认能够调控靶点蛋白并易于转化的小分子药物。本研究即采用了这种策略，最终筛选到FDA批准药物青蒿琥酯，通过靶向DDX39B-TRIM28相互作用的关键残基，导致DDX39B降解，最终有效抑制NSCLC转移。

策略2.直接对最容易临床转化的FDA批准小分子药物库进行高通量SPR筛选，获得能与靶点蛋白结合的FDA药物，再进行功能确认。由于虚拟筛选通过计算机模拟筛药，在真实生物体中不一定能够重现虚拟筛选的结果，并且有些靶点蛋白并未获得完整的晶体结构，也无法进行虚拟筛选。因此，策略2直接通过高通量SPR筛选也越来越多受到研究人员的欢迎。

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10）PET-CT与药物分布小动物活体成像

11）虚拟筛选、天然产物化合物库筛选、FDA化合物库筛选

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