近期《Sci Immunol》发表了一项题为“Coordinated immune networks in leukemia bone marrow microenvironments distinguish response to cellular therapy”的论文。该研究利用单细胞多组学（scRNA-seq、scTCR-seq、scCITE-seq）和CODEX（Phenocycler-Fusion，PCF）空间单细胞蛋白组系统解析了AML骨髓微环境中免疫细胞协同作用的动态网络，揭示了ZNF683高表达的CD8+ T细胞在DLI应答中的核心地位，为优化细胞治疗策略提供了重要依据。

单细胞多组学检测了5例AML应答者和4例AML非应答者的30个骨髓活检样本，以及来自4例AML应答者和3例AML非应答者的DLI产品。通过整合前期发表的16例CML患者的42个骨髓样本数据，结果分析了451,453个单细胞数据，鉴定了53个细胞簇，包括正常造血细胞和白血病细胞。研究发现了AML与CML的髓系分化轨迹的显著不同，AML白血病细胞高表达IL-18等促炎因子，而CML表达组蛋白相关基因。

相比CML，在DLI后，AML应答者（AML-R）的骨髓中扩增了ZNF683高表达的CD8+ 毒性T细胞，这些细胞源自DLI产品，具有克隆扩增特性，并通过scTCR-seq验证其供体来源。细胞通讯分析揭示了ZNF683-Hi CD8+ T细胞与CD8效应记忆T细胞、细胞毒性NK细胞可以形成动态相互作用网络，抑制白血病细胞（如通过GZMA:F2R信号）。

PCF空间单细胞蛋白组分析了6例治疗前和6例治疗后的AML患者骨髓活检样本，重点比较了应答者（AML-R）与非应答者（AML-NR）在DLI治疗前后的空间免疫特征。PCF检测了33种抗体，涵盖T细胞（CD3、CD8、CD4）、NK细胞（CD56、CD16）、B细胞（CD19、CD20）、髓系细胞（CD14、CD11c）、干细胞/白血病（CD34）及功能蛋白（Granzyme B、TIGIT、OX40）等。细胞表型分析发现了治疗后AML应答者的T细胞从抑制性表型（TIM3+、CTLA4+）转变为效应表型（LAG3+、Granzyme B+、CD57+），而AML非应答者的T细胞持续高表达抑制性受体TIGIT，缺乏效应标志物。说明了应答者的T细胞在治疗后获得细胞毒性功能，而非应答者的T细胞因TIGIT信号被抑制，无法有效杀伤白血病细胞。

细胞邻域分析发现了治疗后AML应答者出现了37种邻域类型，包含T、B、NK和髓系细胞的混合群落（如CD8+CD57+ CTL与CD11c+树突状细胞共定位）。而AML非应答者仅19种邻域类型，以髓系细胞（如CD14+单核细胞）和白血病细胞为主，T/B细胞稀少。应答者的邻域中CD8+CTL与CD20+B细胞、CD56+NK细胞形成“免疫三联体”，可能促进抗原呈递和T细胞激活。非应答者的邻域中TIGIT+CD8+T细胞与CD14+单核细胞、CD34+白血病细胞相邻，可能通过TIGIT-NECTIN2抑制信号阻碍免疫应答。这些结果说明了AML应答者的邻域多样性显著高于非应答者，提示协调的免疫网络仅存在于应答者。

该研究也进行了功能验证，体外共培养实验显示了AML应答者的CD8+ TEMRA细胞在接触自体白血病细胞后，IFN-γ和CD137表达显著升高，而非应答者的细胞活性低下。阻断TIGIT或增强ZNF683可能逆转免疫抑制。

该研究首次阐明了AML对DLI反应的免疫细胞动态网络，ZNF683Hi CD8+ T细胞作为核心效应细胞，其扩增依赖骨髓微环境的支持。并且提出了TIGIT-NECTIN2轴是非应答的关键抑制通路。该研究整合了单细胞测序和PCF空间单细胞蛋白组，深度解析了免疫细胞在组织中的定位与协同。

附：本文PCF检测的33种抗体列表