部分患者在免疫检查点抑制剂（ICI）治疗后出产生严重副作用，例如神经免疫相关不良事件（irAE-n）。为了克服诊断和治疗挑战，深入地了解irAE-n的发生机制至关重要。

2023年10月12日，Neuro Oncol（IF=15.9）杂志上发表了一篇题为“Immune signatures of checkpoint inhibitor-induced autoimmunity - a focus on neurotoxicity”的文章，通过质谱流式细胞技术（CyTOF）发现irAE-n患者存在特异性的免疫细胞失调，并通过Luminex芯片技术发现接受ICI治疗的irAE-n患者出现炎症因子和趋化因子的增加。通过建立诊断模型发现效应记忆型CD8⁺ T细胞和CXCL10可作为诊断irAE-n的潜在标志物。

|    研究设计

为了寻找irAE-n的癌症患者中的特异性免疫细胞亚群，研究人员通过质谱流式（CyTOF）分析来自34例irAE-n患者和49名没有irAE-n的对照患者的外周血样本，总共检测分析了48个蛋白靶标。并使用多重细胞因子测定（Luminex）进行血清细胞因子检测。

图1 研究设计

 |   研究结果

1、CyTOF发现与irAE-n相关的T细胞谱、先天免疫亚群和B细胞谱

考虑到ICI治疗靶点主要表达在T细胞上，研究首先将CyTOF数据分析集中在T细胞亚群上。评估了每位参与者大约20000个外周血T细胞，并分析了50个不同簇中37个T细胞标记物的表达，发现irAE-n 患者的效应记忆型CD8⁺ T细胞水平增加（图1A）。由于早期临床研究报告表明B细胞耗竭疗法对irAE-n有益，研究人员分析了非T细胞免疫细胞群体的变化。评估了每个参与者大约50000个非T细胞，并分析了30个簇中21个白细胞标记物，发现irAE-n 患者与对照组相比CD11c⁺cDC 减少，NK 细胞减少，非经典CD16⁺CD14^-单核细胞减少，同时CD14⁺ CD11b⁺单核细胞增加（图1B）。这些发现表明 irAE-n 患者的先天免疫细胞失调。此外，结合前期自身抗体数据，发现自身抗体阳性irAE-n患者存在特异性B细胞改变。

图2 CyTOF发现与irAE-n相关的细胞亚群

2、Luminex发现与irAE-n相关的细胞因子特征

采用Luminex液相芯片检测了血清样本中45种细胞因子/趋化因子/生长因子。结果显示介导免疫细胞运输的趋化因子显著增加，如CXCL10、CCL3、CCL4、CCL5。此外，TNFα、IL-1R显著增加。此外生长因子VEGF-α、PIGF-1、PDGF-BB、HGF在irAE-n中显示出更高浓度。总之，这些结果表明，接受ICI治疗的irAE-n患者出现炎症并增强免疫细胞迁移（图3）。

图3 Luminex发现与irAE-n相关的细胞因子特征

3、irAE-n的潜在外周血标志物

其他病因（例如感染等）可能会出现irAE-n类似的体征和症状。因此，鉴定ICI诱导的irAE-n自身免疫标志物非常重要。研究人员使用多因素逻辑回归研究了不同外周血免疫标志物与 irAE-n之间的关系，发现具有较高的CD8⁺EM1 T细胞比例（阈值= T细胞的7.2%）和较高的CXCL10浓度（阈值= 49.5 pg/ml）的患者出现irAE-n的可能性较高（图4A、4B）。CD8⁺EM1 T细胞比例和CXCL10浓度诊断irAE-n准确度达到82.1%（图4C）。CD8⁺EM1 T细胞频率和CXCL10水平的低相关性表明这些参数与irAE-n独立相关（图4D）。总之，研究结果表明CD8⁺EM1 T 细胞和CXCL10可能是ICI诱导的自身免疫的标志物。

图4 CD8+EM1 T细胞和CXCL10可作为irAE-n外周血标志物

|   总结与讨论

本研究采用CyTOF发现神经免疫相关不良事件（irAE-n）患者的特异性免疫细胞亚群，发现免疫细胞失调（T细胞亚群、先天免疫亚群和B细胞亚群），并通过Luminex芯片技术发现接受 ICI 治疗的 irAE-n 患者出现炎症并增强免疫细胞迁移。结合前期结合前期自身抗体数据，发现自身抗体阳性irAE-n患者存在特异性B细胞改变。最后通过建立诊断模型发现CD8+效应记忆T细胞和CXCL10可作为诊断irAE-n的有潜力的标记物。总之，研究通过联合CyTOF、Luminex和自身抗体分析，全面揭示了检查点抑制剂诱导的自身免疫免疫特征。

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|   相关文献

Müller-Jensen L, Schulz AR, Mei HE, et al. Immune signatures of checkpoint inhibitor-induced autoimmunity - a focus on neurotoxicity. Neuro Oncol. 2023 Oct 12:noad198. doi: 10.1093/neuonc/noad198. Epub ahead of print.