本文首先对接受抗PD-1治疗患者和抗PD-1/DAC治疗的患者的临床数据进行分析，作者发现相较于单一治疗的患者，使用抗PD-1/DAC联合治疗的患者肿瘤体积明显减少（图1A）。为了进一步探究联合治疗的作用机制，作者对两组患者CD8+ T细胞的DNA甲基化和差异表达基因进行了联合分析，发现了3729个同时在两种模型中出现甲基化变化和差异表达的基因。其中Runx3是最显著的基因（图1B）。作者针对Runx3在联合免疫治疗中的作用展开了研究。

图1Runx3可能是DAC改善免疫治疗的关键基因

为了进一步研究DAC疗法的潜在机制，作者构建了肿瘤小鼠模型并定时给药，模拟患者的临床情况。作者发现在抗PD-1/DAC联合治疗时，小鼠的肿瘤体积明显小于单一免疫治疗小鼠（图2A）。同时为了研究联合治疗的细胞机制，作者通过流式细胞术对小鼠的CD8+ T细胞进行了检测。结果显示：在抗PD-1/DAC联合治疗时小鼠的浸润T细胞明显增加，同时具有杀伤能力的T细胞比例也显著提高（图2B）。

DAC治疗时T细胞的浸润程度增加，为了揭示Runx3在DAC治疗时的具体作用，作者使用CyTOF检测了Runx3敲除小鼠中42个蛋白的表达情况，全面的表征了T细胞的功能状态。在Runx3敲除小鼠中CCR3、CCR5显著下调、导致T细胞的浸润被损坏。同时作者观察到Runx3敲除后小鼠的CTLA4、LAG3上调，而IFNγ、IL-2降低，这些细胞因子的变化预示着Runx3敲除小鼠的T细胞功能受损（图3A-B）。以上结果解释了DAC改善免疫治疗的细胞机制。

图3Runx3敲除小鼠的细胞因子变化

在以往的研究中，作者已经发现了Runx3与临床反应之间存在很强的相关性，为了探究Runx3与肿瘤免疫治疗的关联，作者使用肿瘤数据库，分析了Runx3水平与抗PD-1治疗的临床预后的关系。结果显示Runx3的高表达与结直肠癌、乳腺癌、淋巴癌等多种患者抗PD-1治疗后的良好预后有着密切的关系（图4A），这个结果证明了Runx3不仅可以作为DAC改善免疫治疗的关键介质，同时也是临床治疗中的预后标志物。

图4 Runx3与多种肿瘤预后相关

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Liu Z, Li X, Gao Y etal.Epigenetic reprogramming of Runx3 reinforces CD8 + T-cell function and improves the clinical response to immunotherapy.Mol Cancer. 2023 16;22(1):84.