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粪便中外泌体怎么提取?

粪便中外泌体怎么提取?

【概要描述】简单介绍粪便中外泌体怎么提取

粪便中外泌体怎么提取?

【概要描述】简单介绍粪便中外泌体怎么提取

  • 分类:技术解答
  • 作者:华盈生物
  • 来源:
  • 发布时间:2023-09-19 15:07
  • 访问量:
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实验原料:粪便(新鲜或者4℃存储样品)

试剂耗材:1,外泌体提取试剂盒;2,针式过滤器(0.45μm);3,PBS缓冲液(2℃-8℃预冷)

实验步骤:

一、 样品预处理:

(1)粪便样本收集在无菌的宽口容器中,立即使用(收集样品后置于冰上)或冷藏(4°C)。

(2)使用勺子将3g的粪便转移到预先称重的离心管中,向试管中加入预冷(2℃-8℃)的30毫升无内毒素PBS(按照每1g粪便对应10毫升PBS加入)。

(3)通过涡旋振荡器充分混匀粪便样本5分钟。在此步骤中,将高速离心机和离心转子冷却至4°C。

(4)将混匀粪便的离心管放入高速离心机中,在4°C,8000g的温度下离心10分钟。

(5)收集滤过液,使用移液器将其转移到新的离心管中,在4°C,10000g的温度下离心10分钟。

(6)收集滤过液,通过针式过滤器(0.45μm)进行过滤,收集滤过液。

二、 提取外泌体:

(1)滤过液预处理:在去除杂质的离心滤过液中加入Exosome Concentration Solution(ECS试剂),具体的加入剂量如下:(其他剂量请根据表中的试剂用量等比例换算

样品名称 粪便滤过液  样品剂量 20 m  加入ECS剂量 5 mL

(2)溶液混合:加入ECS试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1 min,再放置于4℃静置至少2 h;(增加静置时间可提高外泌体得率,但静置时间不可超过24h)

(3)沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管于4℃以10000 g离心60 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒;(注:尽可能吸净滤过液)

(4)外泌体重悬:取1×PBS均匀吹打离心沉淀物(具体加入剂量如下表),待其溶解后,将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中;

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