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蛋白组学中样本前处理步骤有哪些

蛋白组学中样本前处理步骤有哪些

【概要描述】简单介绍蛋白组学中样本前处理步骤有哪些

蛋白组学中样本前处理步骤有哪些

【概要描述】简单介绍蛋白组学中样本前处理步骤有哪些

  • 分类:技术解答
  • 作者:华盈生物
  • 来源:
  • 发布时间:2023-09-19 14:55
  • 访问量:
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1. 细胞和组织样本的处理:

收集样本: 采集细胞培养物或组织样本时,要确保采样的迅速和准确,以避免蛋白质降解。

细胞裂解: 对细胞样本进行裂解,以释放细胞内的蛋白质。这通常涉及使用裂解缓冲液和机械方法。

组织破碎: 组织样本需要被破碎、粉碎或切片,然后与裂解缓冲液混合。

2. 蛋白质提取:

细胞和组织: 提取蛋白质的方法因样本类型而异。使用合适的缓冲液,如RIPA缓冲液或SDS缓冲液,来裂解细胞或组织,释放蛋白质。

生物体液: 血清、尿液等生物体液中的蛋白质需要进行富集,例如通过沉淀、过滤、离心等方法。

3. 蛋白质富集:

动态范围压缩: 复杂样本中富含高丰度和低丰度的蛋白质。富集低丰度蛋白质可以提高对其的检测灵敏度。常见的富集方法包括凝胶过滤、聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)切片等。

4. 样本洗涤:

去除杂质: 样本可能含有杂质,如盐、脂类等,需要进行洗涤步骤以减少对后续分析的干扰。

5. 蛋白质定量:

比色法: 使用BCA、Bradford或Lowry等比色法来测定蛋白质的浓度,以便在实验中使用适量的样本。

质谱前定量: 对于质谱分析,可以使用定量标准品进行内部标定。

6. 还原和酶解:

还原: 使用还原剂(如二巯基甲酰胺,DTT)还原样本中的蛋白质二硫键,使其变为可酶解的形式。

酶解: 使用蛋白酶(如胰蛋白酶)将蛋白质酶解成肽段,为质谱分析做准备。

7. 肽段分离:

透析或柱层析: 通过透析或柱层析来去除还原剂、酶等残留物,准备肽段进入质谱仪。

8. 数据分析前准备:

标记: 对于定量分析,可以进行同位素标记(如TMT、iTRAQ)来标记样本,以便在质谱分析中进行定量。

分馏: 对于复杂样本,可以进行液相色谱(LC)分馏,以减少复杂性,增加蛋白质鉴定率。

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