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蛋白质翻译后修饰是目前蛋白研究中比较受欢迎的一个重要研究方向,其中磷酸化修饰在生物体中是一种最普遍最重要的调控方式,几乎调节着生命活动的整个过程,包括细胞的增殖、凋亡和分化、信号转导、基因表达、细胞周期以及其他生命活动过程。据统计,哺乳动物细胞内有1/3以上的蛋白质被磷酸化修饰。大多数磷酸化的蛋白质有一个以上的磷酸化位点,并且生物体内磷酸化修饰是一个动态过程,同一种蛋白在不同的时间和空间时刻发生着磷酸化与去磷酸化的交替活动。因此采用磷酸化抗体芯片检测相关信号通路里的蛋白的磷酸化的时候,选择不同的时间点,细胞内的蛋白磷酸化状态可能变化很大。通常我们在选择样本的收集的时间点的时候,具体应该视我们的实验情况而定,一般选择在出现表型之前收集样本,如我们有2组实验,一组是对照组,不加药,一组是药物处理,如果药物处理12h后导致细胞出现明显的增殖、凋亡、或迁移、侵袭能力的改变,这个时候,我们可以收集10h左右的样本开展磷酸化芯片的检测。当然时间不是固定的,有条件的话,可以设计不同的时间点来观察胞内通路的动态变化。
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