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什么是pull down技术?

什么是pull down技术?

【概要描述】简单介绍了小分子药靶筛选的pull down实验技术及其实验步骤。

什么是pull down技术?

【概要描述】简单介绍了小分子药靶筛选的pull down实验技术及其实验步骤。

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小分子药靶筛选的Pull-down实验是一种有效的筛选药物与潜在靶蛋白之间相互作用的体外技术,Pull-down实验基本原理是将小分子药物固定在某种基质上,充当“钓饵”,与蛋白裂解液进行孵育,孵育结束后与化合物结合的蛋白可以通过对基质的分离而分离出来。该方法简单易行,操作方便,在药靶筛选方面已得到广泛的应用。

小分子药靶筛选的Pull-down实验的步骤为:通常使用生物素标记的小分子药物;使用链霉亲和素将小分子药物与固相基质稳定结合;再将生物素标记的小分子药物与待测细胞裂解液或者其他含有目标蛋白的溶液进行孵育,在这一过程中,生物素标记的小分子药物与目标蛋白相互作用并结合在一起,通过清洗除去非特异性结合的杂蛋白,即可获得与生物素标记的小分子药物相互作用的目标蛋白;最后通过LC-MS/MS高分辨率质谱对目标蛋白进行鉴定。

图1:Pull down实验流程图

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发布时间:2021-08-11 17:21:10

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