从细胞膜、胞浆到细胞核，存在多条信号通路串联交叉形成的复杂信号网络。该信号网络在细胞受到胞外刺激后将信号通过级联放大、分散调节等方式传入胞内，引起一系列的综合性细胞应答。一种生物效应的出现往往存在多条信号通路的同步活化，可逆的磷酸化修饰反应则是细胞内部最为普遍和节能的信号蛋白活化调节方式。因此，找到激活的信号通路乃至发生磷酸化调变的通路蛋白，往往成生命科学研究的起点。

在很多情况下，如：

1）当发现一种药物或生物材料能够治疗疾病但不清楚它是激活细胞内哪条通路时；

2）当两种药物联合用药或多种药物成分如复方研究是，不知道它们激活了哪些通路时；

3）当发现某个新的基因，但不清楚它参与调控哪条信号通路的时候；

4）当发现某个基因被报道影响特定通路，但Western blot验证无效时；

5）当我想精准检测某条通路里的多种蛋白的表达及磷酸化表达水平变化时；

6）当我想无偏检测多条通路确定哪些通路激活以及观察信号通路之间的crosstalk时；

均可采用磷酸化抗体芯片进行检测。

以磷酸化广谱筛选抗体芯片PEX100为例，该芯片在片基上高密度结合1318种高特异抗体，分别检测432个信号蛋白的679个磷酸化位点。这些信号蛋白广泛参与多条重要信号通路信号传导过程。芯片针对每一个特定蛋白磷酸化位点，设置一对抗体分别检测其磷酸化（Phospho）和非磷酸化（non-Phospho）状态以提高磷酸化检测灵敏度和稳定性。一次芯片实验即可实现30多条信号通路的同步筛选和具体调变位点的清晰定位，为后续生物现象的深入探索提供明确的研究方向。

下面列举了4篇磷酸化抗体芯片开展通路筛选的经典案例，其思路可学习借鉴。

1）2022年2月，上海市肿瘤研究所所长刘颖斌教授团队在Science Bulletin（IF=11.780）发表研究发现大豆异黄酮的长期暴露与较低的胆囊癌发病风险相关并阐明其机制，研究通过细胞周期信号通路磷酸化抗体芯片PCC238发现，长期暴露于Genistein可以抑制PTK6-AKT-GSK3β通路的功能。

2） 2021年12月，中国人民解放军总医院骨科研究所林云峰团队在Bioact Mater（IF=14.593）发表研究探讨了四面体框架核酸对AC原位再生的影响并研究了相关机制。研究通过体外实验表明四面体框架核酸（tFNAs）显著增强了SMSCs的增殖和迁移，进一步通过PEX100磷酸化抗体芯片发现添加到软骨诱导培养基中的四面体框架核酸（tFNAs）上调Smad2/3的磷酸化，进而促进SMSC的软骨生成能力。

3）2021年1月，上海交通大学医学院附属第九人民医院匡延平研究团队在J Adv Res（IF=10.479）发表研究揭示了孕激素黄体酮影响临床卵母细胞产量的潜在机制。研究发现FSH可挽救黄体酮诱导的卵泡生长和颗粒细胞增殖的抑制作用，进一步通过PEX100磷酸化抗体芯片发现PI3K/AKT和MAPK通路为此过程中的关键信号通路

4）2019年2月，天津医科大学总医院于士柱团队在J Clin Invest（IF=14.808）发表研究发现丝氨酸/精氨酸剪接因子1（SRSF1）为一种重要的胶质瘤驱动因子并阐明其作用机制。研究通过CSP100磷酸化抗体芯片发现SRSF1引导的MYO1B基因AS通过PDK1/AKT和PAK/LIMK通路增加了胶质瘤细胞的致瘤潜力。

综上，磷酸化抗体芯片是筛选信号通路的有力工具。