细胞因子广筛抗体芯片

       细胞因子广筛抗体芯片是将高度特异的细胞因子捕获抗体共价结合在经化学修饰的玻璃片基上，再通过高亲和的配对检测抗体进行信号放大，实现对微量细胞因子的有效检测，特别适合大量候选细胞因子的筛选和检测研究。广筛芯片可绝对定量或相对定量检测近千种细胞因子指标，覆盖大部分可商业化获得的细胞因子配对抗体，除了针对Human、Mouse、Rat等物种设计的特定细胞因子广筛芯片，也可进行个性化定制芯片，检测特定指标。

       细胞因子广筛抗体芯片根据不同研究目的而设计，一般分为L系列、A系列和Q系列3种类型，3种芯片的设计检测原理各有不同：L系列芯片一般采用直接标记法，A系列和Q系列芯片一般采用双抗夹心法。

       （1）直接标记法：是将抗体结合在硅片片基上后，利用抗体与待测样品中细胞因子亲和力直接抓取细胞因子，而这些细胞因子在实验初期已经被均一性地标记上了生物素，抗体抓取细胞因子后，通过链霉亲和素（Streptavidin）结合的Cy3荧光识别生物素，从而实现荧光信号检测。直接标记法只能进行半定量检测，其优势是芯片制作不需要采用配对抗体。因此， 直接标记法芯片可选择的抗体谱较为广泛，芯片的检测通量可高达2000种细胞因子同步检测。直接标记法芯片特别适合在研究初期，对于复杂检测目标的初筛阶段时使用。

       （2）双抗夹心法：该方法是经典的细胞因子检测方法，又称为“三明治夹心法”，其检测原理与传统ELISA类似，只是将示踪基团由辣根过氧化物酶（HRP）更换成了更加稳定的链霉亲和素（Streptavidin）结合Cy3荧光基团。双抗夹心法的捕获抗体和检测抗体均可特异识别目标细胞因子，两种抗体联合使用，不仅提高了细胞因子检测的特异性，也能够进一步放大芯片的检测信号。双抗夹心法芯片配合标准品使用，还可实现多种细胞因子的绝对定量。双抗夹心法芯片特别适合目标较为明确，或希望获得更加准确定量数据类型的研究（如：疾病标志物研究）。

|   广筛抗体芯片优势

●   少量样本检测更多指标：100 uL的液质样本即可检测上千种细胞因子检测指标

●   比ELISA检测更省样本和成本

●   芯片上每种抗体设置2或4个技术重复，保证数据质量

●   适用样本类型：血清、血浆、细胞上清、组织上清、脑脊液、尿液、房水、泪液、玻璃体、唾液、宫腔液、宫颈刮片、关      节液、肺泡灌洗液、骨髓灌洗液、龈沟液、细胞、组织、外泌体

|   广筛抗体芯片列表 

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|   经典案例：细胞因子与猪干细胞移植

       急性肝衰竭（FHF）死亡率高，肝脏器官供需矛盾突出使其治疗成为难题。干细胞移植可能成为FHF的代替治疗方案，但机理尚不明晰，细胞因子广筛芯片助力研究人员探究其作用机制。 研究人员首先建立急性肝损伤猪模型，选用人细胞因子广筛芯片，对模型猪血清中的215个细胞因子进行广泛筛选，筛选到凋亡及免疫通路相关的细胞因子。 研究人员同时收集了外周血单个核细胞（PBMC）进行全基因组表达谱筛选，发现Notch信号通路显著调变。而细胞因子芯片检测出的差异调变因子中有HGF等多个因子均与Notch信号通路有关，细胞因子数据与表达谱数据的联合分析显示Notch通路的激活在干细胞移植免疫排斥中起主导作用。

       最终证实，Notch受体DLL4在干细胞移植组被显著诱导，DLL4处理有利于肝脏恢复，增加动物模型存活率。该研究为基础实验的临床转化提供了理论基础和实验证据。

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