文献赏析

华盈视角:临床医生申请外泌体研究国自然的小窍门

2019/01/29

       外泌体是一种30-150nm的细胞外囊泡,其在疾病标志物、肿瘤微环境等研究领域中扮演着网红般的角色。2018年,国家自然科学基金获批项目中,外泌体相关项目高达418项,资助金额达17642万元,相比2014年,增长近8倍,可谓异常火爆(图1)。 

图1.png

图1 历年国自然资助外泌体项目统计数据


       那么外泌体研究的基本思路是什么?
       临床医生如何搭上外泌体这班快车,做点自己的小研究?

       看惯了CNS系列的微信帖子,总感觉科研离临床医生很遥远…
       正值2019年国自然申请之际,华盈视角通过一篇经典的小文章为您倾情解读外泌体研究的小窍门。

案例解析:适合普通临床医生的外泌体研究思路

文章.png


开篇三连问

       中国临床医生最大的优势是什么?样本!

       什么样本?血清/血浆!

       最想做的研究是什么?临床相关!

       有了上面三个问题的答案,我们想做和能做的研究基本有个轮廓了。给大家介绍的这个案例,影响因子虽然不高(IF= 2.959),但饱含着智慧的光芒。一起看看作者是如何开展研究的。


1. 关于样本

       作者收集了108例结直肠癌(CRC)患者的血清样本(敲黑板:病人平均随访时间是44个月,没有健康组)(表1)。采用PEG富集的方法收集血清中的外泌体(超离更好,就是麻烦点)。

 

表1.png

表1 临床样本基线资料统计


2. 关于指标

       作者从以前研究结果中(也可以是别人的发表结果)找出miR‐548c‐5p这个miRNA作为本次外泌体研究的指标。原因很简单,miR‐548c‐5p这个miRNA在CRC患者中明显低于正常人群,因此,有理由相信在外泌体中,该miRNA有很大可能出现同样结果(把miRNA换成蛋白也很有意义哦)。

       为什么?

       因为,有研究表明,血清/血浆中的miRNA约有70%以外泌体包裹的形式存在,所以无非是重复之前做的血清总miRNA的结果。(...此处省略1万字


3. 关于实验

       没错,作者用最普通的RT-PCR的方式,对miR‐548c‐5p在不同样品中的表达量进行检测,最终发现肝转移的患者血清外泌体中的miR‐548c‐5p表达低于无肝转移的患者,而外泌体miR‐548c‐5p与有无血管浸润和淋巴结转移无明显相关性差异(图2)(肿瘤表型有很多,耐心分析总能找到一个与外泌体相关的)。

 

图2.png

图2 血清外泌体miR-548c-5p与肿瘤表型相关性分析


       由于这些样品都有临床随访资料,因此,可以将miR‐548c‐5p做为CRC病人生存率的一个独立诊断指标。Kaplan‐Meier生存曲线分析显示,血清外泌体miR‐548c‐5p表达量低的患者确实生存时间更短,P = 0.018。(由此看来,临床样本之间也有PK,关键要靠随访资料了…)

 图3.png

 图3 Kaplan‐Meier生存曲线分析


4. 关于外泌体功能

       最后,作者不忘初心,回归到外泌体本身,画龙点睛。外泌体是miR‐548c‐5p的转运形式,在CRC患者中,miR‐548c‐5p低表达,那么是否预示着miR‐548c‐5p有降低结直肠癌成瘤性的可能?

       解决这个疑问的简单办法,就是加个细胞实验

       作者选用经典的HTC116结直肠癌细胞系进行体外培养,将从高表达或低表达miR‐548c‐5p的CRC病人血清中分离的外泌体,加入HTC116细胞培养皿中进行共培养,CCK8实验发现,miR‐548c‐5p高表达的CRC病人外泌体可以显著抑制HTC116细胞的增殖(图4)。 

 

图4.png

图4 CCK8细胞增殖实验检测


        同时,荧光共聚焦显微镜下观察EdU染色的HTC116细胞,同样显示miR‐548c‐5p高表达外泌体能够显著抑制HTC116细胞的增殖(图5),自此为本研究画上一个圆满的小句号。

 

图5.png

图5 荧光共聚焦实验检测

 

小结:

       看到如上的文献解读,临床医生朋友们是否觉得临床科研,尤其是外泌体科研非常的亲民,一点距离感都没有?

       是的,只要医生朋友们平常注意收集典型样本(外泌体研究推荐血浆),遇到合适的时机,一篇有内涵的SCI文章其实离自己并不遥远。

       其实,在外泌体研究领域所发表的文献,无论影响因子多高,文献中的基本研究思路无外乎以下四步:

 

外泌体研究思路.png

  

       如果您不具备外泌体实验的相关条件,只要您有想法和样品,您还可以借助华盈生物的平台,实现自己的科研梦想。

       华盈生物是目前国内提供外泌体研究服务的标杆性企业,我们不仅自主研发了新型的EIQ3外泌体提取试剂盒,还打造了包括外泌体超速离心、外泌体NTA分析、外泌体透射电镜拍摄、外泌体标志物蛋白Western Blot鉴定、外泌体蛋白质谱分析、外泌体分泌蛋白筛选、外泌体microRNA筛选、外泌体microRNA RT-PCR和数字PCR检测等一整套完整的服务平台,以帮助广大科研人员实现外泌体研究的美好诉求。

外泌体研究.png