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    iTRAQ/TMT定量蛋白质组学

     

    iTRAQ标记定量‍


            iTRAQ 技术是由美国AB SCIEX公司研发的一种多肽体外标记技术。iTRAQ试剂由三部分组成:报告基团、平衡基团和肽反应基团(如右图),形成4种或8种相对分子质量均为145的等量异位标签(114-121)。在质谱鉴定过程中,与不同样本中同一多肽结合的各标签均表现为相同的荷质比。

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            在经过二级质谱时,平衡基团发生中性丢失,而报告基团在二级质谱低质量区产生不同的报告离子,释放的信号强度即代表了相应标签所标记样本中同一多肽的相对丰度。

     

    TMT标记定量‍‍‍



            TMT 技术是由美国Thermo Fisher公司研发的一种多肽体外标记技术。TMT与iTRAQ试剂在结构和检测原理上基本类似,也是由报告基团、平衡基团和肽反应基团三部分组成。  而不同的是,TMT试剂盒中127/128/129/130四种标记试剂可以分别加载13C和15N两种异位标签, 也就形成了8种不同的标记试剂。

     

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            该8种标记试剂与126和131两种标记试剂合并,即可形成一套10标试剂盒(如右图)。当待检测的样本数量多于8例时,TMT标记定量方法尤为适用。

    技术路线

    iTRAQ流程图-02.png

                    

    主要仪器设备

    Q Exactive Plus 组合型四极杆 Orbitrap 质谱仪

    分辨率:
    140000 at m/z 200,可选 280000 at m/z 200
    扫描速率:
    最高12 HZ
    质量数范围:
    m/z 50- 6000
    应用范围:
    高通量蛋白质鉴定——复杂样品
                     定量蛋白质组学——iTRAQ/TMT定量
                     修饰蛋白组分析


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    样品要求


                   

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    应用方向


                        ◇  发病机理研究

                        ◇  药物靶点研究

                        ◇  疾病标志物筛选

                        ◇  植物品种改良

                        ◇  工程菌改造

                        ◇  特殊功能蛋白质筛选

    相关文献


    1. Jiang P, et al. Quantitative proteomics analysis of differentially expressed proteins in ruptured and unruptured cerebral aneurysms by iTRAQ. 
    J Proteomics. 2018 Jun 30; 182: 45-52. 
    2. Kim M S, et al. A draft map of the human proteome. Nature, 2014, 509(7502): 575-581. 

    3. Altelaar A F M, et al. Next-generation proteomics: towards an integrative view of proteome dynamics. Nat Rev Genet, 2013, 14(1): 35-48. 

    4. Jones K A, et al. Immunodepletion plasma proteomics by tripleTOF 5600 and Orbitrap elite/LTQ-Orbitrap Velos/Q exactive mass spectrometers. J Proteome Res, 2013, 12(10): 4351-4365.