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    qEV高纯度外泌体尺寸排阻SEC分离柱

     


            qEV尺寸排阻分离柱是由新西兰IZON公司研发和生产的一种基于尺寸排阻法SEC原理的外泌体分离-纯化技术。该技术使用快速、简便,只需要15min就可以提取到完整的外泌体样本,并且相较于其他方法,所提取的外泌体浓度更高,还可以重复使用。

    qEV产品优势

              
     ●   高纯度:去除99%以上的可溶性蛋白质,去除95%以上高密度脂蛋白
      无损伤:保持细胞外囊泡的完整性和生物功能

      标准化:每根分离柱均经过标准化、质量保证,并通过ISO13485标准认证

      可靠性:只要15min就可以得到完整外泌体样本,已经在大规模的实验室试验得到证实

      适用性:适用于多种类型样品的外泌体提取,包括:血清、血浆、尿液、细胞上清、脑脊液、唾液
                        等;尤其适用于外泌体功能研究中,用于细胞培养或动物注射的高
    纯度外泌体的获得


    qEV工作原理

        
            qEV是基于分子排阻法SEC原理,按照分子粒径进行分段分离的方法。基本原理如图1所示,将生物样品流经具有固定孔隙的SEC填充物,吸附粒径较小的分子如蛋白、脂类等,而较大粒径的分子或颗粒不能进入孔隙。在缓冲液的作用下,较大粒径的囊泡(外泌体)流速快,在特定的阶段会被洗脱出来进入样品收集管,成为实验样品,而小分子物质则需要更长的洗脱时间。

        

     

     

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      图1 尺寸排阻SEC原理图



    qEV使用步骤(以qEVoriginal产品为例)


           1、用洗脱缓冲液冲洗柱子。

           2、装入500μL样品。

           3、最开始的3ml是空隙体积,继续向分离柱中添加PBS以洗脱囊泡(外泌体)。

           4、收集空隙体积后的1.5mL液体为高纯度外泌体。

    收集结果展示

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    图2 qEV收集结果展示

           
             如图2,血清样品中收集的组分,用qNano其进行定量测量。在280纳米处用吸光度法测定蛋白质的相对浓度。数据表明,收集的第7至9组分具有最高浓度的囊泡(外泌体),而污染的血清蛋白洗脱的分数为第11至30组分(左图)。通过比较分离前和分离后的囊泡(外泌体)与蛋白质浓度比,第7组分的囊泡富集量为蛋白质的6000倍(右图)。根据样品的不同,如果下游分析分别需要更高的囊泡(外泌体)纯度或更高的囊泡(外泌体)产量,可将第7至9部分或第7至11部分汇集在一起


    产品规格选择

     

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    SEC技术与超速离心技术的对比


    案例1   尺寸排阻SEC比超离UC获取外泌体的
    纯度更高


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    文献解析

            该文献通过对滑膜液经过相同的预处理后,分别使用超离、密度梯度离心和尺寸排阻进行外泌体的分离。并通过WB、TEM对其进行鉴定分析。



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            上图中红框所示的ApoA-1是HDL的标志物,可以发现UC和DGC都无法有效去除HDL,而SEC的WB图中,外泌体标志物的出现和HDL标志物和血清白蛋白的出现几乎不存在时间上的重叠,所以SEC可以收集到比较纯净的外泌体。



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                                   超离                                     密度梯度离心                                   尺寸排阻
           电镜图(如图),超离电镜下的图像,不仅背景杂质多,而且发生了聚集现象,这种聚集会对下游分析产生较大不利影响。相比之下,SEC的背景纯净,外泌体特征明显。


    案例2   尺寸排阻SEC比超离UC获取外泌体
    生物活性更强


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    文献解析

    该实验研究了使用超离UC和尺寸排阻SEC分离的心肌祖细胞(HMECs)培养液的外泌体的功能可能的差异。通过外泌体刺激细胞,诱导EKR磷酸化,然后通过比较外泌体刺激后的pEKR和EKR的比率,来评价不同分离方法制备外泌体的功能活性。

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             WB显示,在相同条件下,无论总蛋白量变化还是粒子数变化,用SEC的方法比超离他的pERK / ERK比率更高,表明SEC收集到的外泌体具有更高的生物活性。

    案例3  尺寸排阻SEC比超离UC获得外泌体得率更大

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    文献解析

    该文献系统地比较了使用超离UC和尺寸排阻SEC两种分离方法对大鼠血浆中外泌体分离的差异。结论表明,尺寸排阻SEC从血浆中分离的外泌体得率比超离UC得率高。

     

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           分别对不同的组分进行收集,比较了纯度较高的5.0-6.5组分的外泌体蛋白,发现SEC的含量会比UC更高。

    对比结论

          
      
        上述几篇文献将尺寸排阻SEC与超离UC、密度梯度离心DGC在收集到外泌体的纯度、生物活性和得率方面作比较,通过实验数据、电镜图、WB图像,发现SEC相较于其他两种分离方法,获取的外泌体纯度更高、生物活性更强、得率更大

    相关文献


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