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    外泌体microRNA数字PCR检测

    外泌体microRNA


           外泌体(Exosomes
    )广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液中。它是具有脂质双层膜结构的微小膜泡,大小为30-150nm左右。外泌体可以携带丰富的RNA、DNA、蛋白质等物质在细胞和组织之间自由穿梭,参与细胞间的通讯网络。外泌体广泛参与了机体免疫应答、抗原呈递、细胞分化、肿瘤生长于侵袭等多种生物过程。


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    1 外泌体生物学过程示意图



           研究发现外泌体中的核酸[1](microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等)
    含量和种类丰富,其中microRNA在外泌体总RNA含量占比超过40%[2](见图2)。同时,由于microRNA具有广泛的生物功能,并且具备良好的生物稳定性,因此成为目前研究最为广泛的外泌体RNA类型[3-5]


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    图2 外泌体RNA分布

    外泌体microRNA的检测技术


            常规生物学实验中,实时定量PCR 技术(RT-PCR)广泛用于microRNA的检测实践中,但外泌体样品中的microRNA丰度极低,普通RT-PCR技术的灵敏度已经不能够满足。第三代
    微滴式数字PCR——ddPCR技术,成为外泌体microRNA检测的首选技术。
            微滴式数字PCR(Droplet digital PCR),又成为“油包水PCR”,在传统的PCR扩增前对样品进行微滴化处理,即将含有核酸分子的反应体系分成成千上万个纳升级的微滴,其中每个微滴或不含待检核酸靶分子,或者含有一个至数个待检核酸靶分子。经PCR扩增后,逐个对每个微滴进行检测,有荧光信号的微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判读为0,根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度(见图3)。微滴式数字PCR技术不佳有效提高了核酸分子的扩增效率,而且由于采用微滴计数的方法进行定量,可以不依赖与RT-PCR的荧光信号和Ct值,对所测样品中的核酸分子进行绝对定量。


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    图3 ddPCR的工作流程


    数字PCR检测服务


            华盈生物推出的微滴式数字PCR(ddPCR)检测服务,特别适用于对外泌体miRNA为代表的低丰度RNA表达,以及微量样品DNA突变的检测分析,实现真正意义的绝对定量。


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    图4 微滴式数字PCR (ddPCR)平台


    数字PCR平台优势


    更特异单分子水平扩增,稀有分子信号不会再被覆盖
    更简便
    –直接绝对定量,不再依赖扩增曲线、内参基因、标准品
    更灵敏
    –分辨率达0.001%,检测样本最低可达1ng
    更精确
    –不受扩增效率影响,通过终点信号计算浓度

    数字PCR 服务流程:



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    外泌体一站式服务


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            华盈生物围绕外泌体研究,开发了一系列的试剂产品和服务项目:包括自主研发的EIQ3外泌体试剂盒、外泌体超速离心、外泌体Nano-sight(NTA)计数、外泌体透射电镜拍摄、外泌体标志物蛋白鉴定、外泌体蛋白质谱分析、外泌体microRNA测序、外泌体microRNA芯片分析、外泌体核microRNA数字PCR检测等。华盈生物“一站式”服务项目,可以满足广大科研用户的多方位研究需求。
           业务垂询:
    400-869-2936


    参考文献


    1. Ibrahim A, Marbán E. Exosomes: Fundamental Biology and Roles in Cardiovascular Physiology [J]. Annual Review of Physiology, 2016, 78(1): 67-83.

    2. Huang Xiaoyi,Yuan Tiezheng,Liang Meihua et al. Exosomal miR-1290 and miR-375 as prognostic markers in castration-resistant prostate cancer.[J] .Eur. Urol., 2015, 67(1): 33-41.

    3. Zhang Yalin,Kim Min Soo,Jia Baosen et al. Hypothalamic stem cells control ageing speed partly through exosomal miRNAs.[J] .Nature, 2017, 548(7665): 52-57.

    4. Ying Wei,Riopel Matthew,Bandyopadhyay Gautam et al. Adipose Tissue Macrophage-Derived Exosomal miRNAs Can Modulate In Vivo and In Vitro Insulin Sensitivity.[J] .Cell, 2017, 171(2): 372-384.e12.

    5. Ferguson Scott W,Wang Jinli,Lee Christine J et al. The microRNA regulatory landscape of MSC-derived exosomes: a systems view.[J] .Sci Rep, 2018, 8(1): 1419.

    6. Melo Sonia A,Sugimoto Hikaru,O'Connell Joyce T et al. Cancer exosomes perform cell-independent microRNA biogenesis and promote tumorigenesis.[J] .Cancer Cell, 2014, 26(5): 707-21.